Plasmide Double Nickase (h) GSTM1: sc-418201-NIC

Le gène humain **GSTM1** code la glutathion S-transférase mu 1, une enzyme de détoxification de phase II qui catalyse la conjugaison du glutathion à des xénobiotiques électrophiles ainsi qu’à des métabolites endogènes réactifs. En limitant le stress oxydant et la formation d’adduits issus de la peroxydation lipidique, GSTM1 contribue à l’homéostasie redox et aux voies de défense cellulaire qui recoupent les réponses antioxydantes régulées par **NRF2**. La perte génétique ou la diminution d’activité de GSTM1 a été associée à des différences interindividuelles de sensibilité aux substances chimiques et de signalisation inflammatoire, et est fréquemment étudiée dans le contexte du métabolisme des carcinogènes et des dommages oxydatifs dans la biologie des voies respiratoires et du foie. Une altération de la fonction de GSTM1 est également pertinente pour la recherche sur les réponses aux expositions environnementales et la variabilité du métabolisme des médicaments dans les cellules humaines.

GSTM1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus GSTM1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de GSTM1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de GSTM1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de GSTM1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.