Plásmido Doble Nickase (h) GSTM1: sc-418201-NIC

El GSTM1 humano codifica la glutatión S-transferasa mu 1, una enzima de desintoxicación de fase II que cataliza la conjugación con glutatión de xenobióticos electrofílicos y de metabolitos reactivos endógenos. Al limitar el estrés oxidativo y los aductos derivados de la peroxidación lipídica, GSTM1 contribuye a la homeostasis redox y a las vías de defensa celular que se intersectan con las respuestas antioxidantes reguladas por NRF2. La pérdida genética o la actividad reducida de GSTM1 se ha asociado con diferencias interindividuales en la susceptibilidad a sustancias químicas y en la señalización inflamatoria, y se estudia con frecuencia en el contexto del metabolismo de carcinógenos y del daño oxidativo en la biología de las vías respiratorias y del hígado. La función alterada de GSTM1 también es relevante para investigaciones sobre respuestas a exposiciones ambientales y la variabilidad del metabolismo de fármacos en células humanas.

GSTM1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus GSTM1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de GSTM1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de GSTM1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con GSTM1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.