Plasmide CRISPR/Cas9 KO GSTM1 (h): sc-418201

Présentation

GSTM1 code la glutathion S-transférase mu 1 (GSTM1), une enzyme de détoxification de phase II qui catalyse la conjugaison du glutathion à des xénobiotiques électrophiles et à des intermédiaires réactifs endogènes. En limitant le stress oxydatif et les adduits issus de la peroxydation lipidique, GSTM1 contribue à l’homéostasie rédox cellulaire et soutient le métabolisme des médicaments, des substances chimiques environnementales et des sous-produits de l’inflammation. Son activité s’articule avec les voies antioxydantes dépendantes du glutathion et, plus largement, avec les réponses cytoprotectrices au stress, influençant la susceptibilité aux dommages oxydatifs de l’ADN. La perte génétique ou la diminution d’expression de GSTM1 a été associée à une variabilité interindividuelle dans la gestion des toxiques et a été étudiée dans des contextes où le stress oxydatif et l’exposition à des carcinogènes contribuent au risque de maladie.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO GSTM1 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène GSTM1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du GSTM1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert GSTM1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine GSTM1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en GSTM1 pour l'étude de la signalisation de GSTM1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de GSTM1 essentiels à la fonction de GSTM1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de GSTM1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le GSTM1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le GSTM1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus GSTM1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le GSTM1 plasmide HDR (h) et le GSTM1 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie GSTM1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles GSTM1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.