GSTM1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-418201-ACT

グルタチオンS-トランスフェラーゼ μ1（GSTM1）は細胞質に存在する第II相解毒酵素であり、求電子性の外因性化学物質（ゼノバイオティクス）や内因性の脂質過酸化産物に対するグルタチオン抱合反応を触媒して、レドックス恒常性を維持し、酸化ストレスに対する細胞防御を支えます。GSTM1の活性は、反応性中間体の除去を促進することで、グルタチオン代謝、活性酸素種（ROS）の緩衝、ならびに化学発がん経路と交差します。GSTM1の遺伝的多様性や欠失多型は、ゼノバイオティクスの処理能力および毒性物質による細胞傷害への感受性に及ぼす影響という観点から広く研究されています。GSTM1の発現変化は、がん生物学、肺疾患、薬物代謝研究に関連する炎症シグナル伝達やストレス応答表現型の差異とも関連付けられています。

GSTM1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性GSTM1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

GSTM1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における GSTM1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はGSTM1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性GSTM1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のGSTM1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるGSTM1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびGSTM1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるGSTM1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。