GSKIP Double Nickaseプラスミド (h): sc-412211-NIC

GSKIP（GSK3β interaction protein）は、グリコーゲン合成酵素キナーゼ3β（GSK3β）に結合し、このキナーゼを多タンパク質からなるシグナル伝達複合体内の適切な位置に配置するのを助ける小型の足場（スキャフォールド）タンパク質をコードします。GSK3依存的なリン酸化イベントを調節することで、GSKIPはWnt/β-カテニンシグナル、cAMP/PKAシグナルの動態、さらに細胞運命決定・増殖・分化プログラムの広範な制御に関わる経路に影響を及ぼし得ます。GSK3を中心としたネットワークの制御異常は、しばしば増殖異常や発生上の表現型の破綻と関連するため、GSKIPは経路間クロストークを解析するうえで有用なノードとなります。キナーゼの足場形成に関与するヒトタンパク質として、GSKIPは疾患関連の細胞コンテキストにおけるシグナル伝達の特異性や区画化（コンパートメント化）の機構研究を支えます。

GSKIP ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における GSKIP 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、GSKIP内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、GSKIPの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、GSKIPが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。