Particules Lentivirales d'Activation (m) GSK3 beta: sc-425249-LAC

Le gène murin **Gsk3b** code la glycogen synthase kinase 3 bêta (**GSK3 bêta**), une kinase sérine/thréonine constitutivement active qui intègre les signaux des voies **PI3K–AKT**, **Wnt/β-caténine** et **mTOR** afin de réguler le renouvellement des protéines dépendant de la phosphorylation ainsi que des programmes transcriptionnels. GSK3 bêta contrôle le métabolisme du glycogène, la progression du cycle cellulaire, l’apoptose et la dynamique du cytosquelette, et module la plasticité neuronale via ses effets sur les protéines associées aux microtubules et la signalisation synaptique. Dans la signalisation Wnt canonique, GSK3 bêta participe au complexe de destruction qui phosphoryle la β-caténine, reliant l’entrée du ligand à des changements d’expression génique. Une activité dérégulée de Gsk3b est impliquée dans des mécanismes pertinents pour la dysfonction métabolique, l’inflammation, la signalisation associée au cancer et la neurodégénérescence, ce qui en fait une cible fréquente pour l’analyse des voies de signalisation dans des modèles murins.

Les particules d'activation lentivirales GSK3 beta (m) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de Gsk3b dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales GSK3 beta (m) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription Gsk3b, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de GSK3 beta. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif Gsk3b ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.