Partículas Lentivirales de Activación (h) GSH-2: sc-407550-LAC

GSX2 (también conocido como GSH-2) codifica un factor de transcripción homeobox que regula programas de expresión génica necesarios para el patrón de organización neural y las decisiones de destino de las células progenitoras durante el desarrollo. En el telencéfalo ventral, GSX2 contribuye a especificar identidades de subtipos neuronales y coordina las transiciones de proliferación a diferenciación mediante la modulación de redes transcripcionales aguas abajo. Su actividad se interseca con vías de señalización del desarrollo y con la regulación dependiente de la cromatina que dan forma a la identidad regional y a la neurogénesis. Por ello, la desregulación de la expresión o la función de GSX2 es relevante para el estudio de anomalías del neurodesarrollo y defectos de especificación de linaje en modelos celulares humanos.

Las partículas de activación lentiviral GSH-2 (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de GSX2 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral GSH-2 (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción GSX2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de GSH-2. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo GSX2 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.