GRPR Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-401637

Descripción general

GRPR (receptor del péptido liberador de gastrina) es un receptor acoplado a proteínas G de siete dominios transmembrana que se une a ligandos del tipo péptido liberador de gastrina/bombesina para regular la movilización de calcio intracelular y la señalización downstream a través de las cascadas de PLC, PKC y MAPK. La actividad de GRPR influye en la proliferación celular, la secreción y procesos neuromoduladores, lo que lo vincula a una regulación dependiente del contexto de la fisiología epitelial y neuronal. La expresión o señalización alteradas de GRPR se han asociado con redes de señalización oncogénica y con la desregulación de vías neuroendocrinas y gastrointestinales en modelos relevantes de enfermedad. Como receptor de membrana con una respuesta definida a ligandos, GRPR ofrece un nodo abordable para analizar la señalización impulsada por GPCR, el tráfico del receptor y las salidas transcripcionales.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO GRPR (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen GRPR en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del GRPR junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de GRPR tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína GRPR.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en GRPR para la investigación de la señalización de GRPR, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de GRPR críticos para la función de GRPR
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de GRPR para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido GRPR CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido GRPR CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus GRPR. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR GRPR (h) y el plásmido HDR GRPR (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología GRPR para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana GRPR definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.