GRP CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-432553

概要

マウスの **Grp** は、ガストリン放出ペプチド（GRP）をコードしており、GRPは主にGタンパク質共役型受容体であるGRPRを介してシグナルを伝達し、細胞内Ca²⁺フラックスおよび下流のMAPK/ERKやPLCシグナル伝達を調節する神経ペプチドである。GRPは神経細胞間コミュニケーション、神経内分泌分泌、平滑筋活動に寄与し、組織コンテキストに応じて概日リズム回路やストレス応答性回路にも影響し得る。免疫系および消化管系では、GRPを介したシグナル伝達が炎症プログラムの調節や上皮生理の制御に関与することが示唆されている。GRP/GRPR軸の機能異常は、異常な細胞増殖、神経炎症、腫瘍関連シグナル伝達ネットワークのモデルでしばしば研究対象となっており、疾患メカニズム研究における重要性を裏づけている。

GRP CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるGrp遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Grp内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Grpのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、GRPタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、GRPシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Grp欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• GRPの機能に不可欠なGrpエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Grpゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• GRP CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびGRP CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Grp遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  GRP HDRプラスミド（m）および GRP HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはGrpホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のGrp標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。