GRP CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-432553

Übersicht

Das murine **Grp**-Gen kodiert das Gastrin-Releasing Peptide (GRP), ein Neuropeptid, das hauptsächlich über den G‑Protein-gekoppelten Rezeptor **GRPR** signalisiert, um den intrazellulären Ca²⁺-Fluss sowie nachgeschaltete **MAPK/ERK-** und **PLC**-Signalwege zu regulieren. GRP trägt zur neuronalen Kommunikation, zur neuroendokrinen Sekretion und zur Aktivität glatter Muskulatur bei und kann – abhängig vom Gewebekontext – zirkadiane und stressresponsive Schaltkreise beeinflussen. Im Immun- und Gastrointestinalsystem wurde GRP-vermittelte Signalübertragung mit der Modulation entzündlicher Programme und der Epithelphysiologie in Verbindung gebracht. Eine fehlregulierte Aktivität der GRP/GRPR-Achse wird häufig in Modellen aberranter Zellproliferation, Neuroinflammation und tumorassoziierter Signalnetzwerke untersucht, was ihre Relevanz für die mechanistische Krankheitsforschung unterstreicht.

Das GRP CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Grp-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Grp-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Grp nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die GRP-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Grp-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der GRP-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Grp-Exone abzielen, die für die GRP-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Grp-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom GRP CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom GRP CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Grp-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das GRP HDR-Plasmid (m) und GRP HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Grp-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Grp-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.