GRP Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-402811
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- GRP O Plasmídeo CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) é um conjunto de plasmídeos, cada um codificando a nuclease Cas9 e um RNA guia (gRNA) de 20 nt específico para o alvo, concebido para uma eficiência máxima de knockout utilizando sequências derivadas da biblioteca GeCKO v2
- As sequências de gRNA direcionam a Cas9 para induzir quebras de cadeia dupla (DSBs) específicas do local no locus genómico GRP, resultando no knockout do gene através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ)
- Os genes de resistência à puromicina e RFP são flanqueados por sítios LoxP, permitindo a remoção de marcadores de seleção através da recombinase Cre (Cre Vector: sc-418923) após o estabelecimento de linhas celulares knockout estáveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:GRP Anticorpo (E-11): sc-271045
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
GRP Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-402811 | 20 µg | $397.00 |
Visão geral
O peptídeo liberador de gastrina (GRP) é um neuropeptídeo que sinaliza por meio da família de receptores da bombesina, principalmente o GRPR, para regular o fluxo intracelular de cálcio, a atividade da fosfolipase C e as vias de sinalização a jusante MAPK/ERK e PI3K-AKT. Em tecidos humanos, o GRP contribui para a comunicação neuroendócrina, a homeostase epitelial e a modulação de respostas secretórias e contráteis. A sinalização GRP–GRPR desregulada tem sido associada a alterações na proliferação, migração e respostas neuroinflamatórias, tornando o GRP um nó relevante em estudos de sinalização oncogênica e da comunicação cruzada entre tumor e microambiente. A expressão e o processamento do GRP também se interligam a vias de maturação de hormônios peptídicos e de secreção regulada, sustentando seu uso como marcador de estados neuroendócrinos e de plasticidade de sinalização.
O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO GRP (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene GRP em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do GRP, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.
O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do GRP na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína GRP.
Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de GRP para a investigação da sinalização de GRP, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.
Características principais
- sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) GRP críticos para a função GRP
Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
Repórter GFP para identificação de células transfectadas
Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos GRP para melhorar a eficiência do knockout
Compatível com administração por transfecção
Variantes de Design
CRISPRs +/- HDRs
- Os gRNAs codificados pelo GRP Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo GRP Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus GRP. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
As construções doadoras HDR codificadas pelo GRP Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR GRP (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia GRP para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo GRP definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.