GRP Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-402811

Descripción general

El péptido liberador de gastrina (GRP) es un neuropéptido que señaliza a través de la familia de receptores de bombesina, principalmente GRPR, para regular el flujo intracelular de calcio, la actividad de la fosfolipasa C y la señalización posterior de las vías MAPK/ERK y PI3K-AKT. En tejidos humanos, el GRP contribuye a la comunicación neuroendocrina, la homeostasis epitelial y la modulación de respuestas secretoras y contráctiles. La desregulación de la señalización GRP–GRPR se ha asociado con alteraciones en la proliferación, la migración y las respuestas neuroinflamatorias, lo que convierte al GRP en un nodo relevante en estudios de señalización oncogénica y del diálogo cruzado entre el tumor y el microambiente. La expresión y el procesamiento del GRP también se entrecruzan con la maduración de hormonas peptídicas y las vías de secreción regulada, lo que respalda su uso como marcador de estados neuroendocrinos y de plasticidad de señalización.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO GRP (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen GRP en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del GRP junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de GRP tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína GRP.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en GRP para la investigación de la señalización de GRP, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de GRP críticos para la función de GRP
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de GRP para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido GRP CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido GRP CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus GRP. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR GRP (h) y el plásmido HDR GRP (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología GRP para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana GRP definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.