Partículas Lentivirales de Activación (h) GRP 75: sc-400471-LAC

HSPA9 codifica GRP75 (mortalin), una chaperona HSP70 asociada a la mitocondria que favorece la importación y el plegamiento de proteínas, así como la proteostasis, dentro de la matriz mitocondrial y en los sitios de contacto mitocondria–retículo endoplásmico (RE). GRP75 contribuye a la biogénesis y al control de calidad mitocondriales, integra las respuestas al estrés con el metabolismo energético y modula la apoptosis y la senescencia mediante interacciones con vías como la señalización de p53 y redes de estrés oxidativo. La alteración de la función de HSPA9/GRP75 se ha relacionado con fenotipos de disfunción mitocondrial y se estudia en contextos que incluyen la neurodegeneración, síndromes de fallo hematopoyético y el metabolismo de células cancerosas. Como regulador central de la resiliencia celular al estrés, GRP75 se investiga con frecuencia por sus funciones en la dinámica mitocondrial, el manejo de especies reactivas de oxígeno y la señalización en las membranas asociadas a mitocondria.

Las partículas de activación lentiviral GRP 75 (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de HSPA9 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral GRP 75 (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción HSPA9, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de GRP 75. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo HSPA9 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.