Plásmido Doble Nickase (h) GRP 75: sc-400471-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)GRP 75 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa GRP 75 (h) y el plásmido de doble nickasa GRP 75 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a HSPA9. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: GRP 75 Anticuerpo (D-9): sc-133137
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) GRP 75 | sc-400471-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) GRP 75 | sc-400471-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
HSPA9 codifica GRP75 (mortalina), una chaperona de la familia HSP70 mitocondrial que facilita la importación, el plegamiento y el control de calidad de proteínas codificadas en el núcleo dentro de la matriz mitocondrial. GRP75 regula la proteostasis mitocondrial, el mantenimiento del potencial de membrana y las respuestas adaptativas al estrés, vinculando la actividad chaperona con la eficiencia de la fosforilación oxidativa y la homeostasis de las especies reactivas de oxígeno. También participa en la comunicación mitocondria–retículo endoplásmico y en el manejo del calcio, integrando el intercambio entre orgánulos con el metabolismo celular. La desregulación de la función de HSPA9/GRP75 se ha asociado con fenotipos de disfunción mitocondrial, tolerancia alterada al estrés y vías relevantes para el cáncer y la neurodegeneración, en las que la proteostasis y la remodelación bioenergética se encuentran perturbadas.
GRP 75 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus HSPA9 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de HSPA9. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de HSPA9. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con HSPA9 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.