Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
GRP 75 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-420983
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- GRP 75 El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico GRP 75, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: GRP 75 Anticuerpo (D-9): sc-133137
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
GRP 75 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-420983 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
Hspa9 codifica GRP75 (mortalin), una chaperona mitocondrial de la familia HSP70 que favorece la importación y el plegamiento de proteínas, así como la proteostasis dentro de la matriz mitocondrial. GRP75 participa en el control de calidad mitocondrial, la regulación de la fosforilación oxidativa y el mantenimiento de procesos relacionados con los clústeres hierro–azufre y el hemo, que influyen en la homeostasis redox. También contribuye a la comunicación mitocondria–retículo endoplásmico (RE) mediante redes de chaperonas que modulan el manejo del calcio y la señalización de estrés. La desregulación de Hspa9/GRP75 se ha asociado con disfunción mitocondrial y fenotipos de estrés celular relevantes para la neurodegeneración, la disfunción cardiometabólica y la remodelación de vías bioenergéticas asociada a la transformación celular.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO GRP 75 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Hspa9 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Hspa9 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Hspa9 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína GRP 75.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Hspa9 para la investigación de la señalización de GRP 75, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de Hspa9 críticos para la función de GRP 75
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Hspa9 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido GRP 75 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido GRP 75 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Hspa9. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR GRP 75 (m) y el plásmido HDR GRP 75 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Hspa9 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Hspa9 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.