Plásmido CRISPR de Activación (h) GRP 75: sc-400471-ACT

HSPA9 codifica GRP75 (mortalin), una chaperona de la familia HSP70 asociada a las mitocondrias que favorece la importación y el plegamiento de proteínas, así como la proteostasis dentro de la matriz mitocondrial. GRP75 contribuye a la bioenergética mitocondrial, al ensamblaje de clústeres hierro‑azufre y a la señalización adaptativa al estrés, y también participa en la comunicación mitocondria–retículo endoplásmico (RE), que influye en el manejo del calcio y la homeostasis redox. A través de estas funciones, HSPA9 se vincula con vías que regulan el control de calidad mitocondrial, la sensibilidad a la apoptosis y las respuestas celulares al estrés oxidativo y proteotóxico. En sistemas experimentales, la desregulación de la actividad y la expresión de GRP75 se ha asociado con alteraciones de la función mitocondrial y con fenotipos relevantes para la neurodegeneración, la disfunción hematopoyética y la biología del cáncer.

GRP 75 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de HSPA9 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

GRP 75 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus HSPA9 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional HSPA9, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de GRP 75. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo HSPA9 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de GRP 75 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía GRP 75 en células tumorales con expresión de HSPA9 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.