Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
group VI iPLA2 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-424697
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- group VI iPLA2 El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico group VI iPLA2, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: group VI iPLA2 Anticuerpo (D-4): sc-376563
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
group VI iPLA2 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-424697 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
Pla2g6 codifica la iPLA2 del grupo VI, una fosfolipasa A2 independiente de Ca2+ que hidroliza los fosfolípidos de membrana para liberar lisofosfolípidos y ácidos grasos libres, incluido el ácido araquidónico. A través de la remodelación lipídica y la señalización, influye en la homeostasis de las membranas, la integridad mitocondrial, el tráfico vesicular y las vías posteriores de eicosanoides y de estrés oxidativo. En sistemas murinos, la actividad de Pla2g6 se ha relacionado con fenotipos neurodegenerativos, la producción de mediadores lipídicos asociada a la inflamación y la susceptibilidad al daño de membrana en tejidos metabólicamente activos. Estas funciones hacen de Pla2g6 un nodo útil para estudiar la regulación impulsada por lípidos de las respuestas celulares al estrés y procesos relevantes para la neuroinflamación.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO group VI iPLA2 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Pla2g6 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Pla2g6 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Pla2g6 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína group VI iPLA2.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Pla2g6 para la investigación de la señalización de group VI iPLA2, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de Pla2g6 críticos para la función de group VI iPLA2
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Pla2g6 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido group VI iPLA2 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido group VI iPLA2 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Pla2g6. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR group VI iPLA2 (m) y el plásmido HDR group VI iPLA2 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Pla2g6 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Pla2g6 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.