Plásmido Doble Nickase (h) group IVF sPLA2: sc-415215-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)group IVF sPLA2 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa group IVF sPLA2 (h) y el plásmido de doble nickasa group IVF sPLA2 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a PLA2G4F. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: group IVF sPLA2 Anticuerpo (C-6): sc-398729
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) group IVF sPLA2 | sc-415215-NIC | 20 µg | $410.00 |
PLA2G4F codifica la fosfolipasa A2 secretora del grupo IVF (sPLA2), una enzima lipolítica extracelular que hidroliza los glicerofosfolípidos de membrana para liberar ácidos grasos libres y lisofosfolípidos. Mediante la regulación de la disponibilidad de ácido araquidónico, PLA2G4F puede influir en la biosíntesis de eicosanoides y en la señalización de mediadores lipídicos que se entrecruza con las respuestas inflamatorias, la biología de la barrera epitelial y la remodelación adaptativa de membranas frente al estrés. Las alteraciones en el recambio de fosfolípidos y en la actividad de sPLA2 se han estudiado en contextos de inflamación crónica y reprogramación lipídica asociada al cáncer, donde los cambios en mediadores lipídicos y en la composición de membrana pueden afectar la proliferación, la migración y el diálogo con el sistema inmunitario.
group IVF sPLA2 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus PLA2G4F en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de PLA2G4F. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de PLA2G4F. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con PLA2G4F alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.