Plásmido Doble Nickase (h) group IVE sPLA2: sc-417296-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)group IVE sPLA2 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa group IVE sPLA2 (h) y el plásmido de doble nickasa group IVE sPLA2 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a PLA2G4E. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) group IVE sPLA2 | sc-417296-NIC | 20 µg | $410.00 |
PLA2G4E codifica la fosfolipasa A2 secretora (sPLA2) del grupo IVE, una enzima que hidroliza los glicerofosfolípidos de membrana para generar ácidos grasos libres y lisofosfolípidos que actúan como segundos mensajeros lipídicos. Mediante la regulación de la disponibilidad de ácido araquidónico, PLA2G4E influye en la biosíntesis de eicosanoides y se integra con la señalización inflamatoria, la remodelación de membranas y el metabolismo lipídico sensible al estrés. La alteración de la actividad de fosfolipasas y del equilibrio de mediadores lipídicos aguas abajo se ha asociado con fisiopatología vinculada a la inflamación y con redes de señalización asociadas a tumores, lo que convierte a PLA2G4E en una diana útil para estudios mecanísticos en inmunología y biología del cáncer. Sus funciones en la conformación de la composición lipídica local también respaldan investigaciones sobre el tráfico vesicular, la función de barrera y las transiciones de estado celular.
group IVE sPLA2 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus PLA2G4E en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de PLA2G4E. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de PLA2G4E. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con PLA2G4E alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.