group IIF sPLA₂ Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-410098-ACT

PLA2G2F codifica a fosfolipase A2 secretada do grupo IIF (sPLA2), uma enzima extracelular que hidrolisa fosfolipídios de membrana para liberar ácidos graxos livres e lisofosfolipídios, moldando assim os estoques locais de mediadores lipídicos. Ao regular a disponibilidade de ácido araquidônico, a sPLA2 do grupo IIF influencia a biossíntese de eicosanoides e vias inflamatórias de sinalização a jusante, incluindo as redes de prostaglandinas e leucotrienos. A expressão de PLA2G2F está ligada à biologia epitelial e a processos associados à barreira, nos quais a remodelação lipídica contribui para diferenciação, respostas ao estresse e programas induzidos por citocinas. A atividade desregulada de sPLA2 e o desequilíbrio de mediadores lipídicos têm sido associados a doenças inflamatórias da pele e a patologias imunomediadas mais amplas, reforçando sua relevância em estudos mecanísticos de inflamação e homeostase tecidual.

group IIF sPLA2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de PLA2G2F sem alterar a sequência de ADN subjacente.

group IIF sPLA2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus PLA2G2F em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição PLA2G2F, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de group IIF sPLA2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus PLA2G2F nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de group IIF sPLA2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via group IIF sPLA2 em células tumorais com expressão de PLA2G2F silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.