Plásmido CRISPR de Activación (h) group IIF sPLA₂: sc-410098-ACT

PLA2G2F codifica la fosfolipasa A2 secretada del grupo IIF (sPLA2), una enzima extracelular que hidroliza los fosfolípidos de membrana para liberar ácidos grasos libres y lisofosfolípidos, modelando así los reservorios locales de mediadores lipídicos. Al regular la disponibilidad de ácido araquidónico, la sPLA2 del grupo IIF influye en la biosíntesis de eicosanoides y en las vías de señalización inflamatoria posteriores, incluidas las redes de prostaglandinas y leucotrienos. La expresión de PLA2G2F se ha vinculado con la biología epitelial y asociada a la función de barrera, donde la remodelación lipídica contribuye a la diferenciación, las respuestas al estrés y los programas inducidos por citocinas. La actividad desregulada de sPLA2 y el desequilibrio de mediadores lipídicos se han asociado con trastornos inflamatorios de la piel y otras patologías inmunomediadas, lo que respalda su relevancia en estudios mecanísticos de la inflamación y la homeostasis tisular.

group IIF sPLA2 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de PLA2G2F sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

group IIF sPLA2 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus PLA2G2F en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional PLA2G2F, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de group IIF sPLA2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo PLA2G2F y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de group IIF sPLA2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía group IIF sPLA2 en células tumorales con expresión de PLA2G2F silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.