GRK 2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400558-ACT

GRK2 (também conhecido como ADRBK1) codifica a quinase 2 de receptores acoplados à proteína G (G protein-coupled receptor kinase 2), uma quinase de serina/treonina que fosforila GPCRs ativados para promover o recrutamento de β-arrestina, a dessensibilização do receptor e o tráfego intracelular. Ao moldar a duração do sinal e o viés de sinalização, a GRK2 modula vias de segundos mensageiros, incluindo cAMP/PKA, a sinalização de fosfolipase C–Ca²⁺ e as cascatas MAPK/ERK, com efeitos a jusante sobre a dinâmica do citoesqueleto e a sinalização inflamatória. A GRK2 também interage com substratos e proteínas de ancoragem (scaffolds) não relacionados a GPCRs, conectando entradas provenientes de receptores à migração celular, ao metabolismo e às respostas ao estresse. A expressão ou atividade desregulada de GRK2 tem sido associada na literatura a alterações na sinalização cardiovascular, disfunção metabólica e vias relacionadas ao câncer, sustentando seu uso como um nó mecanístico em pesquisas de sinalização.

GRK 2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de GRK2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

GRK 2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus GRK2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição GRK2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de GRK 2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus GRK2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de GRK 2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via GRK 2 em células tumorais com expressão de GRK2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.