Plásmido CRISPR de Activación (h) GRK 2: sc-400558-ACT

GRK2 (también conocida como ADRBK1) codifica la quinasa 2 del receptor acoplado a proteína G, una quinasa de serina/treonina que fosforila los GPCR activados para promover el reclutamiento de β-arrestina, la desensibilización del receptor y su tráfico. Al moldear la duración de la señal y el sesgo de señalización, GRK2 modula vías de segundos mensajeros, incluidas cAMP/PKA, la señalización de fosfolipasa C–Ca²⁺ y las cascadas MAPK/ERK, con efectos posteriores sobre la dinámica del citoesqueleto y la señalización inflamatoria. GRK2 también interactúa con sustratos y proteínas andamiaje no pertenecientes a GPCR, conectando las entradas del receptor con la migración celular, el metabolismo y las respuestas al estrés. La expresión o actividad desregulada de GRK2 se ha asociado en la literatura con alteraciones en la señalización cardiovascular, disfunción metabólica y vías relacionadas con el cáncer, lo que respalda su uso como un nodo mecanístico en la investigación de señalización.

GRK 2 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de GRK2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

GRK 2 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus GRK2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional GRK2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de GRK 2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo GRK2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de GRK 2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía GRK 2 en células tumorales con expresión de GRK2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.