Plasmide CRISPR/Cas9 KO GRIP-1 (m): sc-421837

Présentation

Ncoa2 code pour GRIP-1 (glucocorticoid receptor–interacting protein 1), un coactivateur des récepteurs nucléaires qui coordonne la transcription dépendante des hormones en reliant des récepteurs liés à leur ligand à des complexes de modification de la chromatine et à la machinerie transcriptionnelle basale. Dans les cellules murines, GRIP-1 agit au sein de réseaux de signalisation des hormones stéroïdiennes, notamment les voies des récepteurs des glucocorticoïdes, des œstrogènes, des androgènes, des hormones thyroïdiennes et de l’acide rétinoïque, influençant des programmes géniques qui régulent le développement, le métabolisme, les réponses immunitaires et la différenciation cellulaire. En tant que membre de la famille des coactivateurs SRC/p160, GRIP-1 intègre des signaux via des interactions avec des histone acétyltransférases et des facteurs associés au médiateur afin de moduler l’activité des enhancers et des promoteurs. Une coactivation dérégulée des récepteurs nucléaires et un contrôle transcriptionnel altéré impliquant des protéines de la famille NCOA2 ont été associés à des programmes de croissance et de lignée aberrants, faisant de Ncoa2 une cible pertinente pour des études mécanistiques de la régulation transcriptionnelle dans des modèles liés aux maladies.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO GRIP-1 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Ncoa2 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Ncoa2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Ncoa2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine GRIP-1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Ncoa2 pour l'étude de la signalisation de GRIP-1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Ncoa2 essentiels à la fonction de GRIP-1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Ncoa2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le GRIP-1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le GRIP-1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Ncoa2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le GRIP-1 plasmide HDR (m) et le GRIP-1 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Ncoa2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Ncoa2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.