Plásmido CRISPR de Activación (h) GRIN1: sc-405452-ACT

GPRIN1 (inductor 1 del crecimiento neurítico regulado por proteínas G) codifica una proteína enriquecida en neuronas implicada en la extensión de neuritas, la dinámica del cono de crecimiento y la maduración sináptica mediante la modulación de la señalización acoplada a proteínas G y la remodelación del citoesqueleto. Los procesos asociados a GPRIN1 se intersectan con programas de diferenciación neuronal y vías dependientes de la actividad que moldean la conectividad y la plasticidad. La expresión desregulada o las perturbaciones de red que involucran a GPRIN1 se han explorado en el contexto de la biología de enfermedades del neurodesarrollo y neuropsiquiátricas, donde la neuritogénesis alterada y la función sináptica son temas recurrentes. Como efector humano de señalización neuronal, GPRIN1 constituye una diana abordable para estudios mecanísticos de fenotipos relacionados con la conectividad en modelos celulares pertinentes.

GRIN1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de GPRIN1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

GRIN1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus GPRIN1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional GPRIN1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de GRIN1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo GPRIN1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de GRIN1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía GRIN1 en células tumorales con expresión de GPRIN1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.