Plásmido Doble Nickase (h) GRB10: sc-401904-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)GRB10 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa GRB10 (h) y el plásmido de doble nickasa GRB10 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a GRB10. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: GRB10 Anticuerpo (C-11): sc-74509
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) GRB10 | sc-401904-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) GRB10 | sc-401904-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
GRB10 (proteína 10 unida al receptor del factor de crecimiento) es una proteína adaptadora que se une a receptores tirosina quinasas activados, incluidos los receptores de insulina e IGF-1, para modular la intensidad y la duración de la señalización aguas abajo. A través de sus dominios PH y SH2 y de regiones ricas en prolina, GRB10 se conecta con las vías PI3K–AKT–mTOR y MAPK e influye en el tráfico de receptores, el recambio dependiente de ubiquitina y el control por retroalimentación de la señalización de factores de crecimiento. Estas actividades vinculan a GRB10 con la regulación de la proliferación y la supervivencia celulares, así como con la homeostasis metabólica; y se ha implicado la alteración de la expresión o la señalización de GRB10 en la desregulación de vías relacionadas con el cáncer y en perturbaciones del eje insulina/IGF en modelos de enfermedad metabólica. GRB10 también se estudia en contextos de regulación del crecimiento durante el desarrollo y de fenotipos asociados al imprinting.
GRB10 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus GRB10 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de GRB10. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de GRB10. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con GRB10 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.