Plasmide Double Nickase (h) GRASP55: sc-401106-NIC

Le gène humain GORASP2 code GRASP55, une protéine d’empilement et de réassemblage du Golgi qui contribue au maintien de l’organisation des citernes golgiennes et favorise l’arrimage des vésicules ainsi que le trafic membranaire entre le réticulum endoplasmique (RE) et l’appareil de Golgi. GRASP55 participe à la formation du ruban golgien et est impliquée dans la sécrétion non conventionnelle de protéines, contribuant à la protéostasie et à des programmes de trafic adaptatifs en situation de stress. Une perturbation de l’architecture du Golgi dépendante de GRASP55 peut modifier la glycosylation, la sécrétion et les sorties de signalisation cellulaire, des processus fréquemment remaniés dans le cancer, les maladies neurodégénératives et les états inflammatoires. Ainsi, GORASP2 constitue un locus utile pour analyser comment la structure du Golgi s’articule avec l’homéostasie de la voie sécrétoire et des phénotypes cellulaires associés aux maladies.

GRASP55 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus GORASP2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de GORASP2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de GORASP2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de GORASP2.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.