Plasmide Double Nickase (m) granzyme B: sc-420745-NIC

Le gène murin **Gzmb** code la granzyme B, une sérine protéase cytotoxique stockée dans les granules lytiques des lymphocytes T CD8+ activés et des cellules NK, puis libérée au niveau des synapses immunologiques pour éliminer les cellules cibles. Après son acheminement dans le cytosol médié par la perforine, la granzyme B clive des substrats clés afin de déclencher des programmes apoptotiques et inflammatoires, notamment l’activation des caspases et la protéolyse de protéines intracellulaires qui amplifient les signaux de mort cellulaire. L’activité de **Gzmb** est au cœur de la fonction effectrice des lymphocytes cytotoxiques et façonne l’immunité spécifique de l’antigène, avec une large pertinence pour la surveillance immunitaire, l’immunopathologie et les lésions tissulaires en contexte inflammatoire. Une expression ou une activité dérégulée de la granzyme B a été associée à une cytotoxicité altérée des cellules immunitaires et peut influer sur la sévérité d’inflammations de type auto-immun, des réponses aux infections et des interactions tumeur–système immunitaire dans des modèles murins.

granzyme B Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Gzmb dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Gzmb. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Gzmb. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Gzmb.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.