GRAMD1C Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-412329

Descripción general

GRAMD1C (GRAM domain containing 1C) codifica una proteína de transferencia de lípidos anclada al retículo endoplásmico, implicada en el transporte no vesicular de esteroles y en la homeostasis intracelular del colesterol. A través de la detección de membranas dependiente de su dominio GRAM y de su interacción con membranas ricas en lípidos, GRAMD1C se asocia con la biología de los sitios de contacto entre el RE y otros orgánulos, así como con la regulación de la composición lipídica de las membranas. Estos procesos convergen con vías que gobiernan la función mitocondrial, la autofagia/mitofagia y el metabolismo energético celular, lo que convierte a GRAMD1C en un nodo útil para estudiar la comunicación entre orgánulos impulsada por lípidos. La alteración de la expresión o la función de GRAMD1C se ha explorado en el contexto de fenotipos metabólicos y estados celulares asociados al cáncer, lo que respalda su relevancia para estudios mecanísticos del metabolismo lipídico en modelos de enfermedad.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO GRAMD1C (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen GRAMD1C en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del GRAMD1C junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de GRAMD1C tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína GRAMD1C.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en GRAMD1C para la investigación de la señalización de GRAMD1C, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de GRAMD1C críticos para la función de GRAMD1C
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de GRAMD1C para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido GRAMD1C CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido GRAMD1C CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus GRAMD1C. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR GRAMD1C (h) y el plásmido HDR GRAMD1C (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología GRAMD1C para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana GRAMD1C definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.