GRAMD1B Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-408929

Descripción general

GRAMD1B (GRAM domain-containing 1B) es una proteína de transferencia de colesterol anclada al retículo endoplásmico (RE) que participa en el transporte lipídico no vesicular en los sitios de contacto entre el RE y la membrana plasmática. Al unirse al colesterol accesible mediante su dominio tipo StART y responder a señales de fosfoinosítidos en la membrana plasmática, GRAMD1B contribuye a la homeostasis del colesterol, la organización de membranas y la señalización dependiente de lípidos. Estos procesos se solapan con la detección de esteroles, las respuestas al estrés del RE y una regulación metabólica más amplia que influye en programas de crecimiento y supervivencia celular. La expresión o actividad alteradas de GRAMD1B se han investigado en contextos de metabolismo lipídico desregulado y de señalización asociada al cáncer, lo que la hace relevante para estudios mecanísticos de biología de membranas.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO GRAMD1B (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen GRAMD1B en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del GRAMD1B junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de GRAMD1B tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína GRAMD1B.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en GRAMD1B para la investigación de la señalización de GRAMD1B, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de GRAMD1B críticos para la función de GRAMD1B
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de GRAMD1B para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido GRAMD1B CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido GRAMD1B CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus GRAMD1B. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR GRAMD1B (h) y el plásmido HDR GRAMD1B (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología GRAMD1B para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana GRAMD1B definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.