GRAMD1B CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-408929

Übersicht

GRAMD1B (GRAM domain-containing 1B) ist ein im ER verankertes Cholesterin-Transferprotein, das am nichtvesikulären Lipidtransport an Kontaktstellen zwischen endoplasmatischem Retikulum und Plasmamembran beteiligt ist. Durch die Bindung von verfügbarem Cholesterin über seine StART-ähnliche Domäne und die Reaktion auf Phosphoinositid-Signale an der Plasmamembran trägt GRAMD1B zur Cholesterinhomöostase, Membranorganisation und lipidabhängigen Signalübertragung bei. Diese Prozesse überschneiden sich mit der Sterol-Sensorik, ER-Stressantworten und einer umfassenderen metabolischen Regulation, die Programme für Zellwachstum und Überleben beeinflusst. Veränderte GRAMD1B-Expression oder -Aktivität wurde in Zusammenhängen mit dysreguliertem Lipidstoffwechsel und krebsassoziierter Signalgebung untersucht, was GRAMD1B für mechanistische Studien der Membranbiologie relevant macht.

Das GRAMD1B CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des GRAMD1B-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des GRAMD1B-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von GRAMD1B nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die GRAMD1B-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von GRAMD1B-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der GRAMD1B-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf GRAMD1B-Exone abzielen, die für die GRAMD1B-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere GRAMD1B-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom GRAMD1B CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom GRAMD1B CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des GRAMD1B-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das GRAMD1B HDR-Plasmid (h) und GRAMD1B HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von GRAMD1B-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten GRAMD1B-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.