Plásmido Doble Nickase (h) GRAMD1A: sc-408934-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)GRAMD1A consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa GRAMD1A (h) y el plásmido de doble nickasa GRAMD1A (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a GRAMD1A. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) GRAMD1A | sc-408934-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) GRAMD1A | sc-408934-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
GRAMD1A codifica una proteína de transferencia de lípidos que contiene un dominio GRAM, localizada en los sitios de contacto entre el retículo endoplásmico y la membrana plasmática, donde contribuye al transporte no vesicular de colesterol y a la homeostasis de los lípidos de membrana. Al detectar el colesterol accesible y coordinar el movimiento de esteroles, GRAMD1A sostiene la composición de la membrana, la competencia de señalización y la comunicación entre orgánulos, vinculando la disponibilidad de lípidos con las respuestas celulares al estrés. Estos procesos se entrecruzan con vías que controlan el tráfico de membranas, la adaptación metabólica y los microdominios de señalización dependientes del colesterol. La desregulación del manejo del colesterol y de la biología de los sitios de contacto se asocia con frecuencia a rasgos cardiometabólicos y a la remodelación de la membrana en células tumorales, lo que convierte a GRAMD1A en un nodo útil para estudios mecanísticos de fenotipos impulsados por lípidos.
GRAMD1A El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus GRAMD1A en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de GRAMD1A. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de GRAMD1A. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con GRAMD1A alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.