Plásmido CRISPR de Activación (h) GR/NR3C1/Glucocorticoid Receptor: sc-400071-ACT

NR3C1 codifica el receptor de glucocorticoides (GR), un receptor nuclear activado por ligando que se transloca al núcleo tras la unión de la hormona y regula la transcripción mediante elementos de respuesta a glucocorticoides, además de interacciones por acoplamiento (“tethering”) con factores como NF-κB y AP-1. La señalización del GR integra señales endocrinas con la remodelación de la cromatina para controlar programas génicos inflamatorios, la homeostasis metabólica, la diferenciación celular y las respuestas al estrés. A través del crosstalk con las vías de señalización MAPK, PI3K–AKT y de citocinas, NR3C1 ayuda a ajustar redes transcripcionales específicas de cada tipo celular y la regulación por retroalimentación del eje hipotálamo–hipófisis–suprarrenal. La expresión o función desregulada de NR3C1 se ha asociado con una respuesta alterada a los glucocorticoides y se estudia con frecuencia en contextos de desregulación inmunitaria, biología del estrés neuropsiquiátrico y adaptación de células cancerosas a estresores del microambiente.

GR/NR3C1/Glucocorticoid Receptor El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de NR3C1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

GR/NR3C1/Glucocorticoid Receptor El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus NR3C1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional NR3C1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de GR/NR3C1/Glucocorticoid Receptor. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo NR3C1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de GR/NR3C1/Glucocorticoid Receptor en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía GR/NR3C1/Glucocorticoid Receptor en células tumorales con expresión de NR3C1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.