Particules Lentivirales d'Activation (h2) GPT2: sc-403739-LAC-2

Le gène humain GPT2 (glutamic pyruvate transaminase 2 ; alanine aminotransférase mitochondriale) code une enzyme dépendante du PLP qui catalyse une transamination réversible entre l’alanine et l’α‑cétoglutarate pour produire du pyruvate et du glutamate, reliant ainsi le renouvellement des acides aminés au flux carboné mitochondrial. L’activité de GPT2 s’insère dans des programmes métaboliques centraux, notamment le cycle de l’acide tricarboxylique (cycle de Krebs), l’anaplérose et la gestion de l’azote, influençant de ce fait l’équilibre rédox cellulaire et l’adaptation bioénergétique en situation de stress nutritif. Une expression ou une fonction dérégulée de GPT2 a été impliquée dans le remodelage métabolique observé dans des états prolifératifs ainsi que dans des phénotypes neurologiques où le métabolisme mitochondrial des acides aminés est perturbé. L’édition du gène GPT2 facilite les études mécanistiques du métabolisme mitochondrial, les analyses de flux fondées sur des traceurs et l’exploration des dépendances métaboliques dans des modèles de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales GPT2 (h2) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de GPT2 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales GPT2 (h2) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription GPT2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de GPT2. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif GPT2 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.