Plasmide CRISPR/Cas9 KO GPS2 (h): sc-406290

Présentation

Le suppresseur 2 de la voie des protéines G (GPS2) est une protéine adaptatrice multifonctionnelle qui régule la transcription dépendante des signaux et intègre des signaux de stress, inflammatoires et métaboliques. Elle est surtout connue comme composant du complexe corépresseur des récepteurs nucléaires (NCoR)/SMRT–HDAC3, où elle module l’état de la chromatine et réprime des programmes d’expression génique en aval de voies telles que la signalisation TNF/NF-κB et MAPK. GPS2 contribue également au contrôle de la signalisation rétrograde mitochondriale et de la protéostasie en coordonnant des processus dépendants de l’ubiquitine et des réponses transcriptionnelles au stress cellulaire. Une activité dérégulée de GPS2 a été associée à une altération de l’expression des gènes inflammatoires et à des phénotypes métaboliques, ce qui en fait un nœud d’intérêt pour étudier la corégulation transcriptionnelle dans des contextes pertinents pour les maladies.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO GPS2 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène GPS2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du GPS2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert GPS2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine GPS2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en GPS2 pour l'étude de la signalisation de GPS2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de GPS2 essentiels à la fonction de GPS2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de GPS2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le GPS2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le GPS2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus GPS2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le GPS2 plasmide HDR (h) et le GPS2 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie GPS2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles GPS2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.