GPR92 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-436329

Übersicht

Lpar5 kodiert den G‑Protein-gekoppelten Rezeptor GPR92 (auch als LPA5 bekannt), einen lipidsensitiven Rezeptor, der auf Lysophosphatidsäure reagiert und dadurch die Dynamik intrazellulärer Signalübertragung reguliert. In Mauszellen koppelt GPR92 an heterotrimere G‑Proteine und moduliert Signalwege wie cAMP/PKA sowie durch Rho‑Familien‑GTPasen gesteuertes Zytoskelett‑Remodeling; dadurch werden Adhäsion, Migration und rezeptornahe entzündliche Signalgebung geprägt. Die Aktivität von Lpar5 wurde mit dem Verhalten von Immunzellen und barriereassoziierten Antworten in Verbindung gebracht und verknüpft damit die Biologie lipidischer Mediatoren mit Gewebeentzündung und mikroumgebungsbedingten Signalen. Eine dysregulierte LPA–GPR92‑Signalgebung ist daher für mechanistische Studien in der Immunologie, Krebsbiologie und beim fibroseassoziierten Umbau relevant, ohne klinische Ergebnisse zu implizieren.

Das GPR92 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Lpar5-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Lpar5-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Lpar5 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die GPR92-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Lpar5-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der GPR92-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Lpar5-Exone abzielen, die für die GPR92-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Lpar5-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom GPR92 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom GPR92 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Lpar5-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das GPR92 HDR-Plasmid (m) und GPR92 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Lpar5-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Lpar5-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.