GPR92 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-436329

Descripción general

Lpar5 codifica el receptor acoplado a proteína G GPR92 (también conocido como LPA5), un receptor sensor de lípidos que responde al ácido lisofosfatídico para regular la dinámica de la señalización intracelular. En células de ratón, GPR92 se acopla a proteínas G heterotriméricas para modular vías como cAMP/PKA y la remodelación del citoesqueleto impulsada por GTPasas de la familia Rho, configurando la adhesión, la migración y la señalización inflamatoria proximal al receptor. La actividad de Lpar5 se ha vinculado al comportamiento de células inmunitarias y a respuestas asociadas a barreras, conectando la biología de mediadores lipídicos con la inflamación tisular y las señales del microambiente. Por lo tanto, la señalización LPA–GPR92 desregulada es relevante para estudios mecanísticos en inmunología, biología del cáncer y remodelación asociada a fibrosis, sin implicar resultados clínicos.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO GPR92 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Lpar5 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Lpar5 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Lpar5 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína GPR92.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Lpar5 para la investigación de la señalización de GPR92, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Lpar5 críticos para la función de GPR92
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Lpar5 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido GPR92 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido GPR92 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Lpar5. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR GPR92 (m) y el plásmido HDR GPR92 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Lpar5 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Lpar5 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.