GPR78 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-405837

Übersicht

GPR78 kodiert einen G‑Protein‑gekoppelten Rezeptor, der an der transmembranen Signaltransduktion und der Koordination zellulärer Antworten auf extrazelluläre Signale beteiligt ist. Als GPCR ist GPR78 dafür prädestiniert, nachgeschaltete Second‑Messenger‑Signalwege zu modulieren, darunter cAMP‑ und calciumvermittelte Signalgebung, mit potenziellen Auswirkungen auf Programme der Zellproliferation, des Überlebens und der Motilität. Veränderte GPCR‑Expression oder veränderte Signaldynamik sind häufig mit einer gestörten Gewebehomöostase und onkogenen Prozessen verknüpft, wodurch GPR78 für mechanistische Studien in der Krebsbiologie und verwandten Signalphänotypen relevant ist. Die Charakterisierung der GPR78‑Funktion unterstützt zudem das Pathway‑Mapping, das Rezeptoraktivität mit transkriptionellen und metabolischen Anpassungen verbindet.

Das GPR78 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des GPR78-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des GPR78-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von GPR78 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die GPR78-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von GPR78-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der GPR78-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf GPR78-Exone abzielen, die für die GPR78-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere GPR78-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom GPR78 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom GPR78 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des GPR78-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das GPR78 HDR-Plasmid (h) und GPR78 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von GPR78-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten GPR78-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.