Plasmide CRISPR d'Activation (m) GPR55: sc-432690-ACT

Le gène murin *Gpr55* code GPR55, un récepteur couplé aux protéines G atypique impliqué dans la détection des lipides et la transduction du signal en aval de ligands endogènes tels que la lysophosphatidylinositol. L’activité de GPR55 peut mobiliser des voies dépendantes de Gα12/13 et de RhoA, moduler la dynamique du calcium intracellulaire et influencer la signalisation MAPK/ERK, reliant l’activation du récepteur à des modifications de l’organisation du cytosquelette et des programmes transcriptionnels. Dans les contextes immunitaire et nerveux, GPR55 a été associé à la régulation de la signalisation inflammatoire, à la migration cellulaire et à l’excitabilité neuronale. Une signalisation liée à GPR55 dérégulée a été étudiée dans des modèles d’inflammation, de traitement de la douleur et d’homéostasie métabolique, ce qui étaye sa pertinence pour des études mécanistiques des phénotypes pilotés par les GPCR.

GPR55 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Gpr55 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

GPR55 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Gpr55 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Gpr55, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de GPR55. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Gpr55 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de GPR55 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie GPR55 dans les cellules tumorales présentant une expression de Gpr55 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.