GPR54 Lentiviral Activation Particles (h): sc-403766-LAC

KISS1R (GPR54) ist ein GPCR der Klasse A, der Kisspeptine bindet, um die Signalübertragung der Reproduktionsachse und den Beginn der Pubertät durch die Kontrolle der Aktivität von GnRH-(Gonadotropin-Releasing-Hormon-)Neuronen zu regulieren. Nach Ligandenbindung koppelt GPR54 überwiegend an Gαq/11, aktiviert die Phospholipase C, erhöht das intrazelluläre Ca2+ und stimuliert PKC-abhängige Signalwege, mit nachgeschalteten Effekten auf MAPK/ERK-abhängige Transkriptionsprogramme. Dieser Signalweg verknüpft die neuroendokrine Kontrolle mit breiteren zellulären Prozessen, darunter Hormonsekretion, neuronale Erregbarkeit und Genexpression. Eine Fehlregulation oder genetische Variation in KISS1R wurde mit Störungen des Pubertätszeitpunkts und hypogonadotropem Hypogonadismus in Verbindung gebracht; zudem wurde veränderte Signalübertragung im Zusammenhang mit der Biologie endokrin bedingter Tumoren und metastaseassoziierten Signalwegen untersucht.

GPR54 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente KISS1R-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

GPR54 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der KISS1R-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen GPR54-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen KISS1R-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.