Plasmide Double Nickase (h) GPR50: sc-402934-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) GPR50 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide GPR50 Double Nickase (h) et le plasmide GPR50 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant GPR50. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) GPR50 | sc-402934-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) GPR50 | sc-402934-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
GPR50 code un récepteur orphelin couplé aux protéines G (GPCR), structurellement apparenté aux récepteurs de la mélatonine mais considéré comme non canonique du point de vue de la signalisation, avec des rôles marqués dans la régulation neuroendocrinienne et la biologie associée aux rythmes circadiens. Il peut influencer la réactivité cellulaire aux voies de la mélatonine via des interactions récepteur–récepteur ainsi que par la modulation du trafic des GPCR et de leur capacité de signalisation, affectant des processus en aval liés à l’AMPc et des programmes transcriptionnels. Les profils d’expression et les variations génétiques de GPR50 ont été associés à des phénotypes métaboliques et à des traits neuropsychiatriques, ce qui étaye sa pertinence pour l’étude de l’équilibre énergétique, de la régulation de l’humeur et de la fonction hypothalamique. En tant que récepteur membranaire à expression biaisée selon les tissus, GPR50 est également utile pour analyser les interactions croisées au sein des réseaux de GPCR et les sorties de signalisation dépendantes du contexte dans des modèles cellulaires humains.
GPR50 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus GPR50 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de GPR50. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de GPR50. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de GPR50.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.