Plásmido Doble Nickase (h) GPR4: sc-403659-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)GPR4 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa GPR4 (h) y el plásmido de doble nickasa GPR4 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a GPR4. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) GPR4 | sc-403659-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) GPR4 | sc-403659-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
GPR4 codifica un receptor acoplado a proteína G sensible a protones que funciona como sensor del pH extracelular, conectando las señales de un microambiente ácido con la señalización intracelular de segundos mensajeros. Tras su activación, GPR4 puede activar las vías de Gs y G13 para modular la producción de AMPc y la dinámica del citoesqueleto dependiente de Rho, influyendo en la función de la barrera endotelial, el tráfico de leucocitos y la expresión de genes inflamatorios. Esta señalización sensible al pH se integra con procesos reguladores vasculares e inmunitarios que con frecuencia se ven alterados en contextos tisulares asociados a hipoxia y acidosis. La actividad desregulada de GPR4 se ha investigado en relación con la inflamación y la disfunción vascular, proporcionando un vínculo mecanístico entre la acidez del microambiente y fenotipos celulares relevantes para la enfermedad.
GPR4 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus GPR4 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de GPR4. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de GPR4. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con GPR4 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.