Particules Lentivirales d'Activation (h) GPR35: sc-416792-LAC

GPR35 code un récepteur couplé aux protéines G de type rhodopsine, qui agit comme chimiorécepteur dans les tissus immunitaires et gastro-intestinaux. Il se couple principalement à la signalisation Gi/o pour moduler l’AMPc, les flux calciques et les voies MAPK en aval. Parmi les ligands décrits figurent de petites molécules associées au microbiote et au métabolisme, ce qui place GPR35 à l’interface entre la détection de l’environnement et la régulation de l’inflammation. Dans les cellules humaines, l’activité de GPR35 influence le trafic des leucocytes, les réponses de la barrière épithéliale et les programmes de signalisation des cytokines qui façonnent l’homéostasie muqueuse. Des altérations de l’expression ou de la signalisation de GPR35 ont été associées à des mécanismes liés aux maladies inflammatoires chroniques de l’intestin et à la biologie du microenvironnement tumoral, ce qui soutient son utilisation dans des études d’immunométabolisme et de réseaux de signalisation des RCPG.

Les particules d'activation lentivirales GPR35 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de GPR35 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales GPR35 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription GPR35, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de GPR35. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif GPR35 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.