GPR30 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402502-ACT

GPER1はGPR30（GPER）をコードしており、GPR30は膜関連型のエストロゲン受容体として、迅速な非ゲノム性エストロゲンシグナル伝達を仲介し、古典的なエストロゲン応答性の転写プログラムとも統合して機能します。GPR30の活性化により、cAMP/PKA、EGFRのトランスアクティベーション、MAPK/ERK、PI3K/AKT、細胞内Ca²⁺フラックスなどが駆動され、細胞種依存的に増殖、遊走、代謝、炎症シグナルに影響を及ぼします。GPER1/GPR30シグナルの破綻は、ホルモン応答性がん、心血管および代謝機能障害、神経炎症過程に関与するとされ、エストロゲン駆動性の経路クロストークを解析するうえで有用な結節点となります。バイオマーカーと関連づけられるシグナル受容体として、GPR30は細胞状態の遷移、受容体トラフィッキング、ストレス応答遺伝子ネットワークへの影響の観点からもしばしば研究されています。

GPR30 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性GPER1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

GPR30 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における GPER1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はGPER1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性GPR30の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のGPER1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるGPR30依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびGPER1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるGPR30経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。