GPR120 Double Nickase Plasmid (h): sc-401362-NIC

FFAR4 kodiert GPR120, einen langkettige Fettsäuren erkennenden, G‑Protein‑gekoppelten Rezeptor, der in metabolisch aktiven Zellen und verschiedenen Immunzelltypen exprimiert wird und dort als Nährstoffrezeptor fungiert, der die Verfügbarkeit von Lipiden mit intrazellulärer Signalübertragung verknüpft. Nach Aktivierung schaltet GPR120 G‑Protein‑ und β‑Arrestin‑abhängige Signalwege an, die die Dynamik von Second Messengern, Kinasekaskaden und Transkriptionsprogramme modulieren, welche an Insulinsensitivität, Adipozytendifferenzierung und entzündlicher Signalgebung beteiligt sind. Diese Prozesse greifen in eine umfassendere Stoffwechselregulation und in den immunmetabolischen Crosstalk ein, wodurch FFAR4 häufig als zentraler Knotenpunkt in Mechanismen rund um Adipositas und Diabetes sowie in Modellen chronischer Entzündung untersucht wird. Veränderte GPR120‑Signalgebung wurde zudem im Kontext der gastrointestinalen Physiologie und tumorassoziierter Entzündung betrachtet, was seine Eignung als Sondenweg („pathway probe“) in unterschiedlichen zellulären Systemen unterstreicht.

GPR120 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des FFAR4-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von FFAR4 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die FFAR4-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.

Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit FFAR4-Störung.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.