Plásmido CRISPR de Activación (m) GPR120: sc-437271-ACT

Ffar4 codifica el receptor acoplado a proteína G GPR120 del ratón (también conocido como FFAR4), un receptor sensor de lípidos activado por ácidos grasos de cadena larga y omega-3. GPR120 se acopla principalmente a las vías de Gαq/11 y β-arrestina para modular la señalización intracelular de calcio, la actividad de ERK/MAPK y programas transcripcionales que influyen en la producción de citocinas y la homeostasis metabólica. Se expresa en tejidos metabólicamente activos y relacionados con el sistema inmunitario, conectando la detección de nutrientes con la función de los adipocitos, la polarización de macrófagos y las respuestas enteroendocrinas intestinales. La desregulación de la señalización de FFAR4 se ha asociado con inflamación y fenotipos metabólicos, lo que lo convierte en una diana útil para estudiar vías relacionadas con la obesidad, mecanismos de sensibilidad a la insulina e inmunometabolismo mediado por lípidos en modelos murinos.

GPR120 El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Ffar4 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

GPR120 El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Ffar4 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Ffar4, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de GPR120. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Ffar4 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de GPR120 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía GPR120 en células tumorales con expresión de Ffar4 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.