Plásmido CRISPR de Activación (h) GPR120: sc-401362-ACT

FFAR4 codifica GPR120, un receptor acoplado a proteína G (GPCR) sensor de ácidos grasos de cadena larga, que se acopla a la señalización dependiente de Gαq/11 y de β-arrestina para modular la dinámica del calcio intracelular y los programas transcripcionales. En tejidos metabólicos y células inmunitarias, GPR120 influye en la detección de lípidos, la señalización inflamatoria y las vías que sensibilizan a la insulina, conectando la disponibilidad de nutrientes con las respuestas celulares al estrés y la producción de citocinas. Entre los procesos posteriores descritos se incluyen la regulación de la señalización MAPK/ERK, las cascadas inflamatorias asociadas a NF-κB y los programas de diferenciación adipogénica. La actividad desregulada de FFAR4/GPR120 se ha asociado con fenotipos metabólicos relacionados con la obesidad, resistencia a la insulina y estados inflamatorios crónicos, lo que impulsa estudios mecanísticos en adipocitos, macrófagos y modelos epiteliales.

GPR120 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de FFAR4 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

GPR120 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus FFAR4 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional FFAR4, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de GPR120. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo FFAR4 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de GPR120 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía GPR120 en células tumorales con expresión de FFAR4 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.