GPR105 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-405954
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- GPR105 CRISPR/Cas9 ノックアウト（KO）プラスミド（h）は、GeCKO v2ライブラリ由来の配列を用いて最大のノックアウト効率を実現するよう設計された、Cas9ヌクレアーゼおよび標的特異的な20塩基対のガイドRNA（gRNA）をそれぞれコードするプラスミドのプールです
- gRNA配列は、Cas9を誘導してGPR105ゲノム座において部位特異的な二本鎖切断（DSBs）を引き起こし、非相同末端結合（NHEJ）を介して遺伝子ノックアウトをもたらします
- ピューロマイシン耐性遺伝子とRFP遺伝子はLoxP部位で挟まれているため、安定したノックアウト細胞株を樹立した後、Creリコンビナーゼ（Creベクター：sc-418923）を用いて選択マーカーを除去することができる。
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
GPR105 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h) | sc-405954 | 20 µg | $397.00 |
概要
P2RY14 は、UDP-グルコースなどの細胞外ヌクレオチド糖や関連リガンドを感知する、UDP 糖応答性 G タンパク質共役受容体である GPR105 をコードします。GPR105 のシグナル伝達は主に Gi 経路に共役し、cAMP 動態、走化性、炎症関連遺伝子プログラムを調節することで、組織ストレスや代謝物放出と免疫細胞の挙動を結び付けます。発現は白血球集団で高く、マクロファージや樹状細胞の機能を含む自然免疫および獲得免疫応答の制御との関連が報告されています。P2RY14/GPR105 活性の破綻は、炎症性微小環境や、心代謝疾患および肺疾患の文脈に関連する免疫機構への関与が示唆されています。
GPR105 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるP2RY14遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、P2RY14内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。
このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、P2RY14のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、GPR105タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。
このCRISPRノックアウトシステムにより、GPR105シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、P2RY14欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。
主な特徴
- GPR105の機能に不可欠なP2RY14エクソンを標的とするsgRNA
導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
ノックアウト効率を向上させるための、P2RY14ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
トランスフェクションによる導入に対応
設計バリエーション
CRISPRs +/- HDR
- GPR105 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびGPR105 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、P2RY14遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
GPR105 HDRプラスミド（h）および GPR105 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはP2RY14ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のP2RY14標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。