GPR105 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-405954

Descripción general

P2RY14 codifica GPR105, un receptor acoplado a proteína G sensible a azúcares nucleotídicos (UDP) que detecta azúcares nucleotídicos extracelulares como la UDP-glucosa y ligandos relacionados. La señalización de GPR105 se acopla principalmente a vías Gi para modular la dinámica del AMPc, la quimiotaxis y programas génicos inflamatorios, conectando el estrés tisular y la liberación de metabolitos con el comportamiento de las células inmunitarias. Su expresión está enriquecida en poblaciones de leucocitos y se ha asociado con la regulación de respuestas inmunitarias innatas y adaptativas, incluidas funciones de macrófagos y células dendríticas. La actividad desregulada de P2RY14/GPR105 se ha implicado en microambientes inflamatorios y en mecanismos relacionados con la inmunidad relevantes para contextos de enfermedades cardiometabólicas y pulmonares.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO GPR105 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen P2RY14 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del P2RY14 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de P2RY14 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína GPR105.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en P2RY14 para la investigación de la señalización de GPR105, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de P2RY14 críticos para la función de GPR105
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de P2RY14 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido GPR105 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido GPR105 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus P2RY14. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR GPR105 (h) y el plásmido HDR GPR105 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología P2RY14 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana P2RY14 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.