GPNMB Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-430005

Descripción general

Gpnmb codifica la glicoproteína B no metastásica del melanoma (GPNMB), una glicoproteína transmembrana de tipo I enriquecida en macrófagos, células dendríticas, osteoclastos, melanocitos y microglía. GPNMB está implicada en el tráfico lisosomal y endosomal, la fagocitosis, la remodelación de la matriz extracelular y programas de adhesión celular que modulan la activación inmunitaria y la reparación tisular. Su expresión suele inducirse por señales inflamatorias y estrés celular, lo que la vincula a vías que controlan la polarización mieloide, la resorción ósea y la biología de la pigmentación. La desregulación de GPNMB se ha asociado con modelos de neuroinflamación y neurodegeneración, remodelación metabólica y fibrótica, y fenotipos del microambiente tumor–inmunitario, lo que la convierte en un nodo útil para estudios mecanísticos en sistemas murinos.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO GPNMB (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Gpnmb en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Gpnmb junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Gpnmb tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína GPNMB.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Gpnmb para la investigación de la señalización de GPNMB, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Gpnmb críticos para la función de GPNMB
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Gpnmb para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido GPNMB CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido GPNMB CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Gpnmb. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR GPNMB (m) y el plásmido HDR GPNMB (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Gpnmb para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Gpnmb definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.