Plásmido CRISPR de Activación (h) GPNMB: sc-402966-ACT

GPNMB (proteína B de melanoma no metastásico, una glicoproteína) es una glicoproteína transmembrana de tipo I enriquecida en células del linaje mieloide y en poblaciones melanocíticas, donde contribuye a la adhesión celular, la migración y la remodelación tisular. Está implicada en procesos asociados a lisosomas y endosomas y puede modular la señalización inflamatoria y la función de las células presentadoras de antígeno mediante interacciones con la matriz extracelular y con socios reguladores del sistema inmunitario. Se ha informado de una expresión alterada de GPNMB en distintos contextos, incluidos la biología del melanoma, la neuroinflamación, la fibrosis y la remodelación del microambiente tumoral-inmunitario, lo que la convierte en un marcador útil y en un nodo mecanístico en estudios de adaptación al estrés y de programas de diferenciación celular. In vitro, la regulación de GPNMB suele estudiarse junto con vías que controlan la polarización de macrófagos, la actividad de los osteoclastos y fenotipos de tipo epitelio-mesenquimal.

GPNMB El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de GPNMB sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

GPNMB El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus GPNMB en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional GPNMB, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de GPNMB. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo GPNMB y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de GPNMB en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía GPNMB en células tumorales con expresión de GPNMB silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.