Plasmide Double Nickase (h) GPD1: sc-403706-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) GPD1 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide GPD1 Double Nickase (h) et le plasmide GPD1 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant GPD1. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: GPD1 Antibody (E-7): sc-376219
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) GPD1 | sc-403706-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) GPD1 | sc-403706-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Le gène humain **GPD1** code la glycér ol‑3‑phosphate déshydrogénase 1 cytosolique, une enzyme dépendante du NADH qui interconvertit le phosphate de dihydroxyacétone et le glycérol‑3‑phosphate, reliant la glycolyse à la synthèse des glycérolipides et à l’homéostasie redox. En contribuant à la navette du glycérol‑phosphate, GPD1 influence l’équilibre NADH/NAD+, le transfert d’électrons mitochondrial et les flux du métabolisme lipidique selon les conditions nutritionnelles. Une activité altérée de GPD1 a été associée à des phénotypes métaboliques impliquant la gestion des triglycérides, des voies sensibles à l’insuline et l’accumulation de lipides hépatiques, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude de la biologie du tissu adipeux et du foie. En tant que nœud reliant l’utilisation des glucides au stockage des lipides, GPD1 est fréquemment étudié dans des modèles de stress métabolique, d’équilibre oxydatif et de remodelage énergétique.
GPD1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus GPD1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de GPD1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de GPD1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de GPD1.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.