Plasmide Double Nickase (h) gp91phox/CYBB/NOX2: sc-400222-NIC

CYBB code pour gp91phox (NOX2), la sous-unité membranaire catalytique du complexe NADPH oxydase des phagocytes, responsable de la génération d’espèces réactives de l’oxygène lors du burst oxydatif. L’activité de NOX2 soutient la défense immunitaire innée en favorisant la production de superoxyde dans les neutrophiles et les macrophages, et influence des voies de signalisation en aval sensibles à l’état redox, notamment MAPK et NF-κB, qui modulent les réponses inflammatoires. Une altération de la fonction de CYBB est associée à une diminution de la capacité à tuer les microbes et à une homéostasie inflammatoire perturbée, ce qui en fait un nœud clé dans l’étude de la biologie des phagocytes. CYBB est également utilisé comme locus modèle pour étudier l’assemblage et la régulation de complexes oxydases multisous-unités et la signalisation des ROS compartimentalisée.

gp91phox/CYBB/NOX2 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CYBB dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CYBB. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CYBB. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CYBB.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.