Plásmido Doble Nickase (h) golgin 245: sc-404412-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)golgin 245 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa golgin 245 (h) y el plásmido de doble nickasa golgin 245 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a GOLGA4. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: golgin 245 Anticuerpo (G-7): sc-514775
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) golgin 245 | sc-404412-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) golgin 245 | sc-404412-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
GOLGA4 codifica la golgina 245, una proteína de la matriz del Golgi con dominios en hélice enrollada (coiled-coil) que contribuye a la organización de la cinta del Golgi y al anclaje (tethering) de vesículas, necesario para una clasificación eficiente de la carga a través de la vía secretora. La golgina 245 participa en procesos de tráfico de membranas que coordinan el transporte retrógrado y anterógrado entre el Golgi y los compartimentos endosomales, favoreciendo la distribución adecuada de enzimas de glicosilación y el mantenimiento de la arquitectura del Golgi. La alteración de las redes de anclaje y tráfico del Golgi se asocia con cambios en la polaridad celular, señalización de estrés y defectos en el procesamiento de proteínas, que se observan con frecuencia en contextos de cáncer y enfermedades neurodegenerativas. Como marcador y regulador de la dinámica del Golgi, la golgina 245 se utiliza ampliamente para estudiar la organización del orgánulo, el transporte vesicular y las vías relacionadas con la proteostasis en células humanas.
golgin 245 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus GOLGA4 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de GOLGA4. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de GOLGA4. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con GOLGA4 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.