Plasmide Double Nickase (h) golgin 160: sc-403862-NIC

GOLGA3 code la golgine 160, une golgine à domaines coiled-coil localisée à l’appareil de Golgi, qui contribue à l’organisation de son architecture et soutient l’arrimage et le trafic des vésicules entre les compartiments endomembranaires. Au sein de la voie sécrétoire, la golgine 160 participe au tri du cargo et au maintien de l’intégrité du « ruban » golgien, influençant la maturation des protéines et leur acheminement vers des destinations en aval. La perturbation des programmes d’arrimage et de trafic au niveau du Golgi est associée à des réponses de stress cellulaire, à une signalisation altérée et à des modifications de la polarité et de la migration cellulaires, ce qui fait de GOLGA3 une cible pertinente pour étudier les mécanismes reliant l’organisation des organites à des phénotypes associés aux maladies. En recherche biomédicale, la fonction de la golgine 160 est souvent étudiée dans le contexte de la dynamique membranaire, de la régulation de la voie sécrétoire et des perturbations de la protéostase dépendante du Golgi.

golgin 160 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus GOLGA3 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de GOLGA3. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de GOLGA3. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de GOLGA3.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.