GnT-II Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-407393

Descripción general

MGAT2 codifica la N-acetilglucosaminiltransferasa II (GnT-II), una glicosiltransferasa del Golgi medial que cataliza un paso clave en la síntesis de N-glicanos complejos al añadir GlcNAc mediante un enlace β1,2 al brazo de manosa α1,6 de estructuras biantenarias. Esta actividad influye en la maduración de glicoproteínas que regulan el tráfico de receptores, la adhesión célula–célula y la señalización de factores de crecimiento, dando forma a la proteostasis de membrana y a las interacciones extracelulares. Las alteraciones en el ramificado y la composición de los N-glicanos dependientes de MGAT2 se han asociado con una señalización celular desregulada y con cambios en la migración y la invasividad en contextos relevantes para el cáncer, y también se han vinculado a trastornos congénitos de la glicosilación que implican un procesamiento defectuoso en el Golgi. En consecuencia, MGAT2 se estudia con frecuencia en glicoproteómica, biología de la vía secretora y análisis a nivel de rutas del remodelado de N-glicanos.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO GnT-II (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen MGAT2 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del MGAT2 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de MGAT2 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína GnT-II.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en MGAT2 para la investigación de la señalización de GnT-II, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de MGAT2 críticos para la función de GnT-II
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de MGAT2 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido GnT-II CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido GnT-II CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus MGAT2. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR GnT-II (h) y el plásmido HDR GnT-II (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología MGAT2 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana MGAT2 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.