GnRH I Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-401425

Descripción general

GNRH1 codifica la hormona liberadora de gonadotropinas I (GnRH I), un decapéptido hipotalámico que inicia una señalización pulsátil hacia las células gonadotropas de la hipófisis a través del receptor GnRHR (un GPCR), activando las vías de fosfolipasa C/IP3–DAG/Ca2+ y la activación de MAPK. Esta señalización regula la síntesis y la secreción de la hormona luteinizante y la hormona foliculoestimulante, coordinando la función del eje reproductor, el inicio de la pubertad y la fertilidad. La alteración de la expresión de GNRH1 o del procesamiento del péptido se ha implicado en trastornos de la regulación del eje hipotálamo–hipófisis–gónadas, incluido el hipogonadismo hipogonadotrópico congénito y otros fenotipos endocrinos reproductivos relacionados. En modelos celulares y tisulares, GNRH1 se estudia en relación con la diferenciación neuroendocrina, la dinámica de secreción hormonal y el control transcripcional de programas de señalización reproductiva.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO GnRH I (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen GNRH1 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del GNRH1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de GNRH1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína GnRH I.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en GNRH1 para la investigación de la señalización de GnRH I, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de GNRH1 críticos para la función de GnRH I
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de GNRH1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido GnRH I CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido GnRH I CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus GNRH1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR GnRH I (h) y el plásmido HDR GnRH I (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología GNRH1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana GNRH1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.