Plásmido CRISPR de Activación (m) GMF-γ: sc-425658-ACT

Gmfg codifica el factor de maduración glial gamma (GMF-γ), una proteína reguladora de la actina enriquecida en células hematopoyéticas que modula la remodelación del citoesqueleto, los cambios en la forma celular y la migración direccional. GMF-γ influye en la dinámica de actina dependiente de Arp2/3 y se ha implicado en procesos como la quimiotaxis de leucocitos, la adhesión y eventos de señalización que coordinan el tráfico de células inflamatorias e inmunitarias. En modelos murinos y en células inmunitarias primarias, la alteración de la actividad de GMF-γ se ha asociado con un comportamiento desregulado de células mieloides y linfoides, lo que la hace relevante para estudiar vías subyacentes a la inflamación y a las respuestas tisulares mediadas por el sistema inmunitario. Estas características sitúan a GMF-γ como un nodo útil para analizar la señalización asociada a la migración y la homeostasis de las redes de actina en investigación biomédica.

GMF-γ El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Gmfg sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

GMF-γ El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Gmfg en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Gmfg, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de GMF-γ. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Gmfg y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de GMF-γ en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía GMF-γ en células tumorales con expresión de Gmfg silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.